Zawartość
Badania kultur drobnoustrojów często wymagają identyfikacji obecnych w nich organizmów. Gdy niewielka część kultury zostanie wprowadzona na agar zawierający pożywkę, możliwe jest rozdzielenie masy bakterii na pojedyncze jednostki tworzące kolonie. Każda z tych jednostek rozwija się w odrębne kolonie, które wykazują cechy pomagające zidentyfikować organizm.
Cel, powód
Badania mikrobiologiczne wymagają zbadania morfologii poszczególnych organizmów. W niektórych przypadkach organizmy obecne w mieszanej kulturze muszą zostać oddzielone, zanim będzie można je przeanalizować. Dlatego ważne jest, aby izolować te kolonie drobnoustrojów. Kultury bakteryjne zawierają dużą liczbę komórek w jednej kropli. Wysiew przez zubożenie na płytkę agarową rozcieńcza je, tak że pojedyncza komórka bakteryjna osadza się w określonym obszarze płytki. Kilka z tych pojedynczych komórek jest oddzielonych od siebie o kilka milimetrów. Każda z nich dzieli się, tworząc tysiące nowych komórek, co prowadzi do powstania izolowanych kolonii.
Zasada
Płytka agarowa zapewnia pożywkę bogatą w składniki odżywcze, która stymuluje wzrost i namnażanie mikroorganizmów. Do wysiewu ścieków stosuje się metodę prążkowania kwadrantowego, w której cała płyta jest podzielona na cztery ćwiartki. Gdy przechodzisz z jednej ćwiartki do drugiej, następuje stopniowe rozcieńczanie oryginalnej kultury na całej dostępnej powierzchni. Kwadrant, w którym zaczynasz, wykazuje gęsty i nierozróżnialny wzrost drobnoustrojów, który wygląda jak dywan mikroorganizmów, podczas gdy ostatni przedstawia izolowane kolonie.
Materiały
Siew spalin wymaga płytek z agarem odżywczym, pętli do zaszczepiania, hodowli bakterii, roztworu dezynfekującego, takiego jak Lizol 10%, oraz palnika Bunsena. Będziesz także potrzebował sprzętu ochronnego, takiego jak fartuch, rękawiczki i okulary chroniące przed chlapaniem. Inokulum do powstawania rozstępów wykonuje się z hodowli bakterii za pomocą pętli i drapiąc płytki z odżywczym agarem. Palnik Bunsena służy do podpalania rączki podczas wykonywania rowków. Przed rozpoczęciem eksperymentu oczyść powierzchnię roztworem środka dezynfekującego.
metoda
Użyj niewielkiej ilości inokulum, aby wysiać w pierwszym kwadrancie ruchem do przodu i do tyłu. Spal rączkę i pozwól jej ostygnąć, dotykając nią części płytki agarowej, która nie została zaszczepiona. Dotknij jednego końca obszaru, który właśnie zasiałeś, i rozciągnij go stamtąd do drugiej ćwiartki. Podpal i ponownie ochłodź pętlę, a od drugiego obszaru wykonaj trzecią ćwiartkę. Powtórz ten sam proces z czwartą ćwiartką.
