Zawartość
Zimny alkohol służy do oddzielania DNA od roztworów na bazie wody, co pozwala na jego oczyszczanie w celu późniejszych testów genetycznych. Dodanie alkoholu do roztworu zawierającego DNA jest prostym sposobem na uczynienie go czystym w niższych temperaturach i spowolnienie enzymów, które go degradują, dając lepsze wyniki ekstrakcji.
Łamanie ścian komórkowych
Procedury ekstrakcji w celu uzyskania czystego DNA muszą pozbyć się wszystkich molekularnych i chemicznych składników tkanki, z której DNA jest ekstrahowany. Pierwsze kroki obejmują zniszczenie ścian komórkowych. Można to zrobić za pomocą różnych środków chemicznych, które są żrące dla błon komórkowych, ale nie uszkadzają DNA. Komórki można również poddać sonikacji, homogenizacji lub zmieleniu w celu zniszczenia błon.
Usuwanie lipidów
Po zniszczeniu ścian komórkowych dodaje się detergent, aby pozbyć się tłuszczów i olejów tworzących błony komórkowe. Detergenty powodują rozpuszczanie olejów i tłuszczów w roztworze.
Usuwanie białek
Białka i enzymy można trawić przez dodanie proteazy do roztworu. Proteazy rozkładają białka na małe peptydy i aminokwasy.
Precypitacja DNA
Dodanie lodowatego alkoholu do roztworu spowoduje wytrącenie i agregację DNA. Materiał genetyczny można zebrać przez odwirowanie próbki i zdekantowanie warstwy cieczy. Powinien istnieć jako mały osad na dnie probówki wirówkowej.
Oczyszczanie DNA
DNA można przemyć przez ponowne zawieszenie w zimnym roztworze alkoholu i ponownie odwirować kilka razy, aby uzyskać bardzo czystą próbkę. Typowe stosowane alkohole obejmują etanol i izopropanol. Proces ten pozostawia bardzo czystą próbkę w rygorystycznych testach.
