Zawartość
Wysokosprawna chromatografia cieczowa (HPLC) jest powszechną metodą analizy laboratoryjnej, w której próbka jest rozdzielana na składniki chemiczne, gdy przechodzi przez kolumnę. Ta kolumna jest wypełniona porowatym materiałem, zazwyczaj żelem krzemionkowym. Standardowa kolumna z odwróconą fazą, jak C8, może czasami zapychać się lub ulegać zanieczyszczeniu. Kolumny te można pobrać za pomocą bardzo prostych technik.
Instrukcje
-
Odłącz kolumnę i odwróć jej pozycję, aby faza ruchoma wchodziła teraz przez to, co normalnie jest wyjściem kolumny. Dołącz wylot do drugiego końca kolumny (który był oryginalnym wpisem) i pozwól mu spłynąć do wylotu.
-
Pompuj serię rozpuszczalników w celu zmniejszenia polaryzacji. Zalecaną podstawową serią jest rozpoczęcie od metanolu, następnie przełączenie na acetonitryl, a następnie acetonitryl / izopropanol (75:25), izopropanol, chlorek metylenu i heksan. Jeśli faza ruchoma znajdująca się w kolumnie była chłonna, zaleca się przejście z wodą przed metanolem. Wystarczający jest przepływ od jednego do dwóch mililitrów na minutę i należy przepompować około dziesięciu kolumn objętościowych każdego rozpuszczalnika. Kolumna objętości jest wewnętrzną przestrzenią kolumny i jest obliczana przez (0,7 x pi x (DI / 2) ^ 2 x L), gdzie DI to wewnętrzna średnica kolumny, a L to długość.
-
Przepompuj kolejne dziesięć objętości izopropanolu przez kolumnę, aby przygotować go do użycia z oryginalną fazą ruchomą. Jeśli oryginalna faza ruchoma została wyściełana, przepompuj również wodę przez kolumnę za izopropanolem, zanim powróci do pierwotnej fazy ruchomej.
-
Odłącz kolumnę, odwróć ją i ponownie zatrzaśnij, tak aby znalazła się w pierwotnym położeniu (tak, że faza ruchoma wchodzi w prawą stronę kolumny). Ponownie podłącz wyjście głośnika do detektora.
Odzyskiwanie kolumny
Jak
- Jeśli ten proces nie wyczyści dokładnie kolumny, można zastosować mieszaninę 50:50 dimetylosulfotlenku (DMSO) i dimetyloformamidu (DMF). Pozostałości białek i jonów metali mogą wymagać innych typów rozpuszczalników, takich jak odczynniki oszczędzające jony lub roztwór kwasu etylenodiaminotetraoctowego (EDTA).
Uwaga
- W niektórych urządzeniach kręgosłup będzie miał szorstkie metalowe sito jako wlot. W takim przypadku przywrócenie kolumny pozwoli opuścić fazę stacjonarną i nie jest to zalecane. W razie wątpliwości skonsultuj się ze sprzedawcą.
- Rozpuszczalnik stosowany w tym procesie jest potencjalnie toksyczny po spożyciu i wdychaniu. Podczas obsługi należy stosować normalne środki ostrożności w laboratorium.
Czego potrzebujesz
- Urządzenie do HPLC
- Woda
- Metanol
- Acetonitryl
- Izopropanol
- Chlorek metylenu
- Heksan
