Zawartość
Wysokosprawna chromatografia cieczowa (HPLC) jest narzędziem służącym do oddzielania substancji z mieszaniny. Oddzielanie i identyfikacja niektórych chemikaliów odbywa się głównie w kolumnie chromatograficznej systemu. W CLAE dostępnych jest wiele typów kolumn, a każdy z nich jest używany do określonego typu analizy. Kolumna C18 jest najsilniejszą ogólnie stosowaną niepolarną kolumną. Po ciągłym używaniu przez dłuższy czas, szybkość przepływu rozpuszczalnika przez niego spada, a czas analizy wydłuża się. Inną przyczyną skrócenia czasu analizy jest posiadanie próbek, które pozostawiają niewielkie ilości substancji chemicznych w materiale kolumny, co ogranicza możliwość ich oddzielenia. Odnowienie jego powierzchni można przeprowadzić poprzez potraktowanie materiału szeregiem specjalnych rozpuszczalników w celu oczyszczenia go z wszelkich pozostałych próbek i rewitalizacji materiału podporowego.
Krok 1
Zdejmij kolumnę C18 z kierunku przepływu i umieść ją w przeciwnym kierunku. Przepuszczenie rozpuszczalnika z powrotem przez nią złagodzi efekt akumulacji, który pojawia się z czasem. Należy uważać, aby nie pozostawić zbyt dużej ilości materiału na końcu kolumny. Niektóre fabryki używają większej siatki u góry, więc gdy przepływ zmienia się, siatka znajduje się poniżej. Ta metoda przywracania nazywana jest odwróceniem przepływu. Aby zapobiec przedostawaniu się osadów do detektora systemu i możliwym powodowaniu przeszkód, należy pozwolić mu działać bez podłączonego detektora i skierować przepływ z kolumny do utylizacji.
Krok 2
Umieścić rurkę do przepuszczania rozpuszczalnika w szeregu rozpuszczalników, aby wymyć każdy związek zatrzymany w kolumnie w przeciwnym kierunku. Rozpuszczalniki te różnią się pod względem właściwości hydrofilowych. Zmieniając je, będziesz eluował związki o równie zróżnicowanej hydrofilowości. Użyj kolejno 50 ml każdego z następujących rozpuszczalników: woda (jeśli używasz buforu), metanol, izopropanol, dichlorometan, heksan, dichlorometan i izopropanol.
Krok 3
Wymień kolumnę we właściwym kierunku i pozwól, aby rozpuszczalnik przepłynął przez nią. Użyj co najmniej 75 ml, aby go umyć przed kontynuowaniem. Przetestuj go za pomocą wzoru, który był używany, gdy był nowy, i sprawdź wyniki. Zwróć uwagę podczas osiągania maksymalnych punktów retencji i całkowitego czasu analizy. Stopień, w jakim te atrybuty pasują do początkowego testu, gdy był jeszcze nowy, wskaże stopień, w jakim kolumna została przywrócona. Jeśli wyniki nie są zadowalające, wymień kolumnę na nową i wyrzuć starą.
